,又称“聚酶链式反应”,是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。
能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段,于几小时内扩增至十万乃至百万倍。
其原理基本与人体细胞内DNA复制像似,但反应体系相对简单。
当然了,这不意味着PCR简单。
相反,PCR是非常难的.
首先通过高温“变性”,把一段双链结构的DNA解链,变成两条单链结构DNA。
之后“退火”,在低温下让“引物”和作为模板的DNA互补结合,形成局部双链。
最后中火“延伸”,通过DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链产生延伸反应,变成两条双链结构的DNA。
接下来不断重复这个过程。
1变2,2变4,4变8,8变16,16变32……
通过PCR技术,可以从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。
比如亲子鉴定;
比如疫苗研究;
比如病毒疾病防治;
又或者遗传病研究等等,都需要大量用到PCR。
当然,周文今天做的水稻蚜虫生化试剂实验,其实是没有必要做PCR的。
蚜虫是一种很低级的虫子,一般直接用药物作用在其身上,然后看它的遗传特性就行了。
之所以还要做PCR,更多的目的也是为了学习PCR。
PCR反应体系包含了水、缓冲液、DNTP(脱氧核糖核苷三磷酸)、引物P1/P2/DNA模板以及TAQ酶。
等一切都准备好之后,周文调节好提取枪的量程,然后提取30μl的水到三组PCR管里。
吸液的时候严格按照操作规程,垂直吸液、慢吸慢放。
换过枪头后,提取了5毫升的缓冲液到PCR管中。
再分别向管中加入DNTP/P1/P2/DNA模板……
得益于这段时间的学习,除了一开始有些紧张外,周文做起来有条不紊。
等所需原料添加完毕后,接下来就是离心了。
按照要求设定好转速后,等了三分钟,离心完成。
周文从离心机里取出装着混合液的PCR管,立刻放到了PCR仪上,进行扩增。
设定94℃预变性4min。
然后设定20次循环扩增阶段。
高温、低温、中温、高温……
1变2,2变4,4变8,8变16,16变32……
周文焦急的等待着,心情就像产房外的丈夫一样,心里默默祈祷着“母子平安”,同时也在想,不知道等会生出来的是男是女?身体健康与否?
就在这时,周文突然想到系统积分可以加快实验进度,与其在这里傻等几个小时,要不加快看看?
反正这里也没有人看到。
想到这里,周文立刻召唤出个人属性页面,点击积分后,眼前弹
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